РУАЭСТ (RUAEST)
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ДЕТЕКЦИЯ ДНК РИККЕТСИЙ МЕТОДОМ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ
Статья посвящена разработке высокоэффективного метода выявления генетического материала риккетсий, основанного на полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием оригинальных праймеров к наиболее консервативным участкам гена цитратсинтазы (gltA). Аналитическая чувствительность разработанного ПЦР-РВ-теста позволяет выявлять от 80 геном-эквивалентов в анализируемой пробе в течение 3 ч. Высокая специфичность тест-системы экспериментально подтверждена определением нуклеотидных последовательностей амплифицированных фрагментов гена gltA. Апробация ПЦР-РВ-теста проведена на коллекции из 310 клещей видов I. persulcatus, I. pavlovskyi, D. reticulatus. Показано, что разработанный вариант праймеров и зонда позволяет с высокой степенью чувствительности и специфичности выявлять ДНК различных видов риккетсий, распространенных на территории России (R. sibirica, R. raoultii, R. helvetica, R. tarasevichiae). Предлагаемый ПЦР-РВ-тест может быть также использован для выделения фрагмента гена gltA с целью определения нуклеотидной последовательности и последующего генотипирования риккетсий. Использование предложенного метода облегчит задачу мониторинга природных очагов риккетсиозов.