Оптимизация методики определения каталитических параметров оксидазы D-аминокислот в реакции окисления цефалоспорина с с помощью ВЭЖХ

Половина общего количества цефалоспориновых антибиотиков разных поколений производится из 7-аминоцефалоспорановой кислоты, которую до недавнего времени получали с помощью органического синтеза. На смену органическому синтезу постепенно приходит двустадийный биокаталитический процесс, на первой стадии которого происходит ферментативное окисление природного антибиотика цефалоспорина С под действием оксидазы D-аминокислот (DAAO). Стандартная методика определения активности DAAO основана на определении концентрации выделяющегося пероксида с помощью сопряженной реакции с пероксидазой из корней хрена. Поскольку в процессе окисления цефалоспорина С пероксид водорода вступает в неферментативную реакцию с промежуточным продуктом, то для определения активности фермента наиболее корректно следить за убылью субстрата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В данной работе мы провели оптимизацию методики определения концентрации цефалоспорина С с помощью ВЭЖХ в реакционной смеси в процессе его окисления оксидазой D-аминокислот. Используя разработанную методику, мы определили каталитические параметры для DAAO из дрожжей Trigonopsis variabilis дикого типа и одной из ее мутантных форм в реакции окисления цефалоспорина C.

• Тишков В.И.
• Осипова Т.А.
• Скиргелло О.Е.
• Голубев И.В.
• Комарова Н.В.

• Прикладные науки. Медицина. Технология

• Естественные науки
• Физико-математические науки